2008-9-22 10:29:00  来源:    网友评论()

　　实例190  纯化盐藻多糖制备
　　谢强胜等开发出制备纯化盐藻的工艺，其特点是用胰蛋白酶水解蛋白质，获得高纯度盐藻多糖。
　　( 1 ）工艺流程
　　盐藻干粉～脱脂盐藻泥～脱极性杂质盐藻泥一弱碱提取～酶水解液～灭酶液～沉淀蛋白～离心一减压浓缩～沉淀～离心～盐藻多糖
　　( 2 ）主要步骤
　　① 脱脂、脱甘油  称取定量干燥盐藻粉，加入10倍丙酮分3 次提取β-胡萝卜素等脂溶性成分，收集丙酮滤液。滤渣用乙醇回流提取数次，以去除极性较大的杂质。
　　② 提取、脱蛋白乙醇处理完毕后收集滤渣，用10倍纯净水分散，以lmol / L 氢氧化钠溶液调节pH 值为10 。升温至85 ℃ 提取10h 。然后降温至45～50 ℃ ，用lmol / L 盐酸调节pH 值为8 . 0～ 8 . 5 ，加入盐藻粉质量5%的胰蛋白酶，保温酶解4～8h 。也可以将pH 值调节为7.0，加入5 ％中性蛋白质进行水解。水解完成后升温至85～95 ℃ 灭酶活10～15min 。换热或自然冷却至常温时用lmol / L 盐酸调节pH 值为4.0～5.5 ，使蛋白质沉淀。然后离心，收集上层清液，用截留分子量10 万的透析膜对流水透析过夜，除去小分子杂质。
　　③ 浓缩  将透析液进行真空减压浓缩，其温度为那-95 ℃ ，真空度为-0.1～0.08MPa ，浓缩至体积为原液体积l / 8～ 1 / 5 时止。
　　④ 分离  向浓缩液中加入95 ％乙醇，使乙醇浓度达到75 % ,静置沉淀过夜。次日虹吸上层乙醇溶液，收集沉淀用40倍水溶解后进行离心分离，去除杂质。收集上层清液，加入少量浓度为10%的表面活性剂十六烷基三甲基氯化铵（CTAC）溶液，与37摄氏度保温5h，离心获得沉淀。将沉淀用浓度0.2mol/L的NaCl溶液重新溶解，然后对水透析过夜节其浓度为75 ％。静置过夜，离心，收集沉淀进行真空干燥，获得白色盐藻粗多糖。粗多糖中总糖29.01 % ，蛋白质18.67%，硫酸根12.85%，己糖醛酸15.35%。
　　⑤ 精制  将粗多糖用少量蒸馏水溶解，然后上DEAE-232色谱柱或DEAE-纤维素色谱柱，色谱柱用pH6.0乙酸-乙酸钠缓冲液平衡。接着用0.01～1mol/L氯化钠溶液洗脱，洗脱流速为0.5～1倍树脂体积/h。收集洗脱液，装入截留分子量2万以上的聚乙二醇进行透析浓缩。然后将浓缩液进行冷冻干燥，获得纯化盐澡多糖。
　　（3）主要指标
　　纯化盐藻多糖为白色粉末，产品糖含量为85 . 50 % ，硫酸根含量为4 . 63 % ，分子量548082.83 。